液相色譜儀（HPLC）作為現(xiàn)代分析實(shí)驗(yàn)室的核心設(shè)備，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。然而，在日常使用過(guò)程中，儀器難免會(huì)出現(xiàn)各種故障問(wèn)題，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)效率。本文將系統(tǒng)介紹液相色譜儀常見(jiàn)的六類故障現(xiàn)象，包括保留時(shí)間異常、峰形問(wèn)題、基線噪聲、壓力異常、氣泡問(wèn)題以及重復(fù)性差等，并提供詳細(xì)的解決方案和預(yù)防措施，幫助操作人員快速診斷和排除故障，確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。

保留時(shí)間異常問(wèn)題

保留時(shí)間是液相色譜分析中最重要的參數(shù)之一，其異常變化直接影響定性定量分析的準(zhǔn)確性。保留時(shí)間異常主要表現(xiàn)為三種情況：波動(dòng)、縮短和延長(zhǎng)。

當(dāng)保留時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)時(shí)，首先應(yīng)檢查柱溫控制情況。如果色譜柱設(shè)置為室溫運(yùn)行，環(huán)境溫度的變化會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移，應(yīng)將柱溫箱設(shè)置為恒定溫度（如25℃或30℃）。其次，等度洗脫與梯度洗脫轉(zhuǎn)換時(shí)，需要足夠時(shí)間使系統(tǒng)達(dá)到平衡，通常需要用10倍以上柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱13。此外，緩沖液濃度過(guò)低（<25mmol/L）也會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間不穩(wěn)定，此時(shí)應(yīng)提高緩沖液濃度。若上述措施無(wú)效，則可能是色譜柱被污染或達(dá)到使用壽命，需要更換保護(hù)柱或新色譜柱。

保留時(shí)間縮短通常與流速增加有關(guān)，應(yīng)檢查泵的流速設(shè)置是否準(zhǔn)確。柱溫設(shè)置過(guò)高同樣會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間縮短，需核實(shí)溫控系統(tǒng)。進(jìn)樣量過(guò)大或樣品濃度過(guò)高時(shí)，減少進(jìn)樣量或稀釋樣品可解決問(wèn)題。流動(dòng)相組成變化，特別是有機(jī)相揮發(fā)導(dǎo)致比例改變，或兩相互溶不良產(chǎn)生沉淀，都會(huì)影響保留時(shí)間。此外，流動(dòng)相pH值超出3-7.5范圍可能導(dǎo)致固定相流失，進(jìn)而改變保留特性。

保留時(shí)間延長(zhǎng)則與流速降低相關(guān)，需檢查泵流速設(shè)定及管路是否有泄漏。柱溫設(shè)置偏低也會(huì)延長(zhǎng)保留時(shí)間。與縮短情況類似，流動(dòng)相組成變化和pH值異常同樣會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間延長(zhǎng)。針對(duì)這些情況，操作人員應(yīng)定期校準(zhǔn)流速和溫度，使用高質(zhì)量的HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，并確保充分混合和脫氣。

峰形異常問(wèn)題

峰形異常是液相色譜分析中另一類常見(jiàn)問(wèn)題，主要包括峰拖尾、峰展寬、肩峰或分叉等現(xiàn)象，這些問(wèn)題直接影響分離效果和定量準(zhǔn)確性。

峰拖尾可能由多種因素引起。色譜柱超載時(shí)，減少進(jìn)樣量或稀釋樣品可改善峰形，也可換用更高載樣量的色譜柱。色譜柱性能下降（如固定相流失或污染）時(shí)，更換新柱是最直接的解決方案。系統(tǒng)死體積過(guò)大（如連接管路過(guò)長(zhǎng)或內(nèi)徑過(guò)粗）會(huì)導(dǎo)致峰展寬和拖尾，應(yīng)盡量減少連接管路長(zhǎng)度，使用細(xì)內(nèi)徑（如0.1mm）管路。對(duì)于硅羥基引起的次級(jí)相互作用，可通過(guò)增加緩沖液濃度、降低流動(dòng)相pH值或使用添加劑（如三乙胺）來(lái)抑制。樣品中的雜質(zhì)干擾也會(huì)導(dǎo)致峰拖尾，此時(shí)需優(yōu)化樣品前處理步驟或調(diào)整流動(dòng)相組成。

峰展寬問(wèn)題通常與進(jìn)樣技術(shù)有關(guān)。進(jìn)樣體積過(guò)大時(shí)，應(yīng)使用流動(dòng)相配制樣品以減少溶劑效應(yīng)。樣品過(guò)載則需降低濃度或減少進(jìn)樣量。進(jìn)樣閥中殘留氣泡會(huì)造成峰擴(kuò)展，進(jìn)樣前后應(yīng)充分排除氣泡。高粘度流動(dòng)相會(huì)降低傳質(zhì)效率，導(dǎo)致峰展寬，可提高柱溫或改用低粘度溶劑。等度洗脫時(shí)保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（>30min）可考慮增加流速或改用梯度洗脫。與峰拖尾類似，系統(tǒng)死體積過(guò)大也是峰展寬的常見(jiàn)原因，應(yīng)優(yōu)化連接管路。

肩峰或分叉峰通常表明色譜柱存在問(wèn)題。進(jìn)樣量過(guò)大或樣品濃度過(guò)高時(shí)，減少進(jìn)樣量或稀釋樣品可改善峰形。樣品溶劑強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)（如純有機(jī)相）會(huì)導(dǎo)致初始區(qū)帶變形，應(yīng)使用與初始流動(dòng)相組成相近的弱溶劑溶解樣品。色譜柱頭污染或填料塌陷是分叉峰的常見(jiàn)原因，輕者可嘗試反向沖洗，嚴(yán)重時(shí)需更換新柱或重新填裝柱頭。

基線問(wèn)題與鬼峰

基線問(wèn)題主要包括基線噪聲和鬼峰，這些干擾會(huì)降低檢測(cè)靈敏度并影響積分準(zhǔn)確性。

基線噪聲可能由多種因素引起。流動(dòng)相或檢測(cè)池中存在氣泡時(shí)，應(yīng)對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理（超聲、He氣鼓泡或在線脫氣）。檢測(cè)器氘燈老化會(huì)產(chǎn)生連續(xù)噪聲，更換新燈可解決問(wèn)題。隨機(jī)噪聲通常源于系統(tǒng)污染，應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品并使用HPLC級(jí)試劑。電源干擾（如電壓波動(dòng)）會(huì)導(dǎo)致偶發(fā)噪聲，使用穩(wěn)壓電源可有效改善。

鬼峰（即非樣品來(lái)源的雜峰）是困擾許多分析人員的難題。色譜柱未充分平衡時(shí)，繼續(xù)用流動(dòng)相沖洗直至基線平穩(wěn)。樣品溶劑與流動(dòng)相不一致時(shí)，溶劑峰會(huì)干擾分析，應(yīng)盡量使用流動(dòng)相溶解樣品。進(jìn)樣閥殘留會(huì)產(chǎn)生固定位置的鬼峰，需用強(qiáng)溶劑（如甲醇、乙腈）清洗進(jìn)樣閥，并優(yōu)化清洗程序。水質(zhì)不合格（如含有有機(jī)物）是常見(jiàn)鬼峰來(lái)源，必須使用HPLC級(jí)水配制流動(dòng)相。

針對(duì)這些基線問(wèn)題，預(yù)防勝于治療。流動(dòng)相應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，混合溶劑需先混合再過(guò)濾（0.45μm濾膜），并經(jīng)脫氣處理。更換流動(dòng)相時(shí)需按程序操作：互溶流動(dòng)相可直接更換；不互溶流動(dòng)相需用中間溶劑（如異丙醇）過(guò)渡；緩沖液更換前應(yīng)先用蒸餾水沖洗系統(tǒng)。定期維護(hù)和合理操作可顯著減少基線問(wèn)題的發(fā)生。

壓力異常與氣泡問(wèn)題

壓力異常是液相色譜系統(tǒng)最直觀的故障指示，主要包括高壓、壓力波動(dòng)和無(wú)壓力三種情況。

柱壓過(guò)高通常由堵塞引起。緩沖鹽（如乙酸銨）在柱內(nèi)沉積時(shí)，可先用40-50℃純水低速正向沖洗，逐漸提高流速，待壓力下降后換常溫純水沖洗，最后用甲醇沖洗30分鐘。樣品污染導(dǎo)致的壓力升高，需先用純水反向沖洗，再用甲醇-異丙醇(4:6)混合液沖洗，最后依次用甲醇、水和甲醇正向沖洗。預(yù)防措施包括：樣品前處理（過(guò)濾、離心）、避免過(guò)高濃度樣品、分析后沖洗系統(tǒng)去除鹽分。

壓力波動(dòng)多與泵系統(tǒng)有關(guān)。單向閥寶石球與閥座間卡有異物會(huì)導(dǎo)致密封不良，拆下單向閥超聲清洗（丙酮為溶劑）可解決問(wèn)題。泵密封墊磨損需更換新墊圈。大量氣泡進(jìn)入泵體時(shí)，可在泵運(yùn)行時(shí)用注射器在出口處抽除空氣。日常應(yīng)注意儲(chǔ)液瓶濾頭始終浸入液面下，流動(dòng)相充分脫氣，避免吸入空氣。

氣泡問(wèn)題常見(jiàn)于流動(dòng)相和檢測(cè)器。當(dāng)Purge操作無(wú)法清除持續(xù)氣泡時(shí)，通常因過(guò)濾器（浸于緩沖液中）滋生霉菌而堵塞。處理方法是：將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸中超聲清洗，或浸泡12-36小時(shí)，再用純水沖洗；清洗后，用純水沖洗系統(tǒng)1小時(shí)，最后用甲醇沖洗半小時(shí)246。檢測(cè)池氣泡可通過(guò)提高流速?zèng)_洗或輕輕敲擊流通池排出。為預(yù)防氣泡問(wèn)題，應(yīng)定期更換緩沖液（不超過(guò)2-3天），避免微生物生長(zhǎng)；高鹽流動(dòng)相使用后立即用純水沖洗系統(tǒng)。

重復(fù)性差與日常維護(hù)

分析結(jié)果重復(fù)性差會(huì)嚴(yán)重影響數(shù)據(jù)可靠性，常見(jiàn)原因包括進(jìn)樣系統(tǒng)問(wèn)題和操作不當(dāng)。

進(jìn)樣閥漏液（如轉(zhuǎn)子密封墊磨損）會(huì)導(dǎo)致進(jìn)樣量不準(zhǔn)確，更換相應(yīng)密封件可解決問(wèn)題。加樣針未插到底或切換速度不均勻會(huì)影響進(jìn)樣精度，應(yīng)確保快速平穩(wěn)地從LOAD切換到INJECT狀態(tài)。樣品量不足或存在氣泡也會(huì)導(dǎo)致重復(fù)性差，需檢查樣品瓶液位并排除氣泡。

日常維護(hù)對(duì)預(yù)防故障至關(guān)重要。流動(dòng)相儲(chǔ)存應(yīng)注意：有機(jī)相用棕色瓶避光保存；水相現(xiàn)配現(xiàn)用；緩沖液添加抑菌劑（如0.02%NaN?）。色譜柱維護(hù)包括：避免過(guò)高pH（>8）和溫度（>60℃）；使用保護(hù)柱；長(zhǎng)期保存時(shí)用適當(dāng)溶劑沖洗后密封13。系統(tǒng)沖洗程序：每天工作結(jié)束后用純水沖洗鹽分，再用甲醇保存；每周用強(qiáng)溶劑（如異丙醇）清洗。

樣品前處理同樣關(guān)鍵。樣品應(yīng)充分溶解，避免不溶物堵塞系統(tǒng)；復(fù)雜基質(zhì)需經(jīng)過(guò)濾（0.22μm）或離心；避免進(jìn)樣過(guò)高濃度樣品，以防柱頭污染。建立完整的儀器使用記錄（壓力、基線、保留時(shí)間等）有助于早期發(fā)現(xiàn)潛在問(wèn)題。

通過(guò)系統(tǒng)了解這些常見(jiàn)故障現(xiàn)象及其解決方案，操作人員可以更高效地排除問(wèn)題，確保液相色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定運(yùn)行和數(shù)據(jù)可靠性。定期預(yù)防性維護(hù)和規(guī)范操作是減少故障發(fā)生率、延長(zhǎng)儀器壽命的關(guān)鍵所在。